呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒
核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书
【产品名称】
呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
【包装规格】
预分装，48反应/盒；预分装，96反应/盒。
【预期用途】
本试剂盒适用于体外定性检测患者咽拭子等样本中呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒核酸。
【检验原理】
本试剂盒基于实时荧光PCR技术，分别选取呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒核酸片断相对保守区作为扩增靶区域，设计特异性引物及荧光标记探针，通过实时荧光PCR体系扩增对呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒进行定性检测。
PCR反应液中含有：特异性引物、探针，PCR反应Buffer、酶混合物，核苷酸单体（dNTPs）、Mg2+等成分，以实现对呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒核酸灵敏特异地检测。
【储存条件及有效期】
-25至25℃避光保存，有效期6个月。
【适用仪器】
AGS4800、ABI 7500、ABI 7300、LightCycler480等荧光定量PCR仪。
【样本要求】
1.样品采集（注意无菌操作）
咽拭子：将拭子头越过舌根，在受检者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次；取出拭子，将拭子头浸入含病毒保存液的管中，密封送检。
2.样品保存和运送
样本收集后迅速送检，按要求运输或保存待检。
【检验方法】
1.核酸提取
拭子标本须在病毒保存液中涡旋充分，以洗下拭子上粘附的病原体及含有病原体的细胞等。建议取不低于200µL的液态样本进行核酸提取。提取试剂可选择合适的商业化产品。
本试剂盒中的质控品参与提取，用于对环境和PCR检测试剂的质控。
2.PCR扩增（ABI 7500仪器操作为例，ABI 7300、LC480等仪器参照此操作及仪器操作手册）
2.1 向PCR反应管中分别加入提取后的质控品、待测样本核酸各20 µL，盖上管盖，震荡混匀10秒后离心数秒，放入PCR扩增仪。
2.2 探针检测模式设置为：Reporter Dye1：FAM、Reporter Dye2：VIC、Reporter Dye3：Cy5，Quencher Dye1：NONE； Passive Reference：NONE。
反应条件设置为：
3 结果分析设置
3.1 反应结束后保存检测数据文件。
3.2 分析条件设置：根据分析后图像调节Baseline的start值、stop值以及Threshold的Value值（可根据实际情况自行调整，调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analysis获得分析结果，在Report界面察看结果。
【质量控制】
1.阴性质控品：FAM、VIC、Cy5检测通道无扩增或曲线无明显对数增长期；
2.阳性质控品：FAM、VIC、Cy5检测通道扩增曲线有明显对数增长期，且Ct值≤36；
以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。
【结果判定】
1. 如果检测样品的FAM、VIC、Cy5检测通道扩增曲线无对数增长期或Ct值＞42，可判样品为阴性；
2. 如果FAM、VIC、Cy5中有任意通道Ct值≤42，且曲线有明显的对数增长期，可判样品为对应病原体核酸阳性（通道和对应病原体见下表）。
通道 | FAM | VIC | Cy5 |
对应病原体 | 呼吸道合胞病毒 | 甲型流感病毒 | 乙型流感病毒 |
【检测方法的局限性】
1.样本检测结果与样本收集、处理、运送及保存质量有关。
2.样本处理时没有控制好交叉污染，可能出现假阳性结果。
3.病毒在流行过程中的基因突变则也可能导致假阴性结果。
4.由于不同提取方法的原理不同，采用不同核酸提取试剂进行样本处理时核酸提取效率存在一定差异，用户可根据具体要求进行选择确认。
5.本检测结果仅供参考，如需确诊病例请结合临床症状及其他检测手段。
【产品性能指标】
本产品与感染部位相同或感染症状相似的其他病原体（腺病毒、柯萨奇病毒、葡萄球菌、肺炎球菌、流感杆菌、结核分枝杆菌等）无交叉反应。
【注意事项】
1.本产品仅用于科研，不能用于临床诊断；
2.实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格分区进行（试剂准备区、标本制备区、扩增和产物分析区），所用消耗品应灭菌后一次性使用，实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用；
3.为试剂和标本准备阶段提供生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器；
4.试剂使用前要8,000rpm离心数秒后使用；
5.标本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃；
6.实验完毕用10%次氯酸或75%酒精处理工作台和移液器,然后用紫外线灯照射20－30分钟；
7.本试剂盒内阳性质控品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
